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Actin assay Kit

Actin은 무엇인가요?
Globular multi-functional protein으로 microfilament를 형성합니다. Cytoskeleton의 주요 인자중 하나로, 다양한 cellular processes에 관여합니다.
(Muscle contraction, Cell motility, Cell division, Cytokinesis, Vesicle/organelle movement, Cell signalling, Cell junctions, Cell shape)
G-actin과 F-actin의 차이는 무엇인가요?
G-actin은 globular structure를 띄는 monomer이며 F-actin은 G-actin의 polymer로 filamentous structure입니다. 두 개의 F-actin이 double helix 구조를 이뤄 microfilament를 구성합니다.
Actin polymerization은 어떻게 일어나나요?
G-actin에서 F-actin으로의 전환은 ATP Hydrolysis에 의해 일어납니다.
G-actin에 ATP가 결합하여 ATP-G-actin 형태가 됩니다. ATP가 ADP+Pi로 가수분해 되면서 polymerization이 되어 F-actin이 형성되어집니다.
이 과정에 thymosin 과 profilin이 관여합니다.
Intracellular actin의 농도는 어느 정도입니까?
Non-muscle cell에서는 2-3 mg/ml (46-70 uM), muscle cell에서는 10-30 mg/ml (230-960 uM)입니다.
어떤 조건에서 Actin polymerization이 일어나나요?
G-actin의 assembly constant와 dissociation constant 사이의 비율을 나타내는 Cc (Critical Concertration)에 의해 Actin polymerization이 조절됩니다.
Monomer인 G-actin의 수치가 Cc보다 높으면 Cc의 수치가 동일해질 때까지 polymerization이 일어납니다.
in vitro actin polymerization을 위한 실험방법은 어떻게 됩니까?
실험방법은 다음과 같습니다.
  1. General actin buffer (Cat. No. BSA01)에 2 mM ATP (Cat. No. BSA04-001)를 첨가하여 1X Actin buffer를 준비합니다.
  2. Actin protein을 1번에서 제조한 Action buffer에 0.4 mg/ml이 되도록 희석한 뒤 Ice에서 1시간 동안 처리합니다.
  3. Polymerization inducer (Cat. No. BSA02)를 첨가한 뒤, 상온에 1시간 동안 처리합니다.
  4. Polymerization 과정이 일어나 F-actin이 형성되게 됩니다.
* 2번 단계 후에 150,000 x g에서 2시간 원심분리하여 pellet과 80% supernatant를 이용하여 polymerization 연구가 가능합니다.