특징
- 엑소좀, 미세소포체등과 같은 세포외 소포체(extracellular vesicles) 분리에 사용됩니다.
- 일반적인 벤치탑 원심분리기를 이용하여 45분 안에 분리할 수 있습니다. (초고속 원심분리기 불필요)
- Urine/media sample 전용 시약(#ME-020)과 plasma 전용 시약(#ME-020P)으로 제공됩니다.
- 분리된 EV는 IHC, Western blotting, staining, PCR, RT-PCR, Mass Spectrometry profiling, nanoparticle tracking, electron microscopy등의 다양한 분석에 이용될 수 있습니다.
- 20번 분할 수 있는 용량으로 제공됩니다.
원리
- Vn96 peptide(US Patent # 8,956,878)가 EVs의 표면에 있는 Heat Shock Proteins (HSPs)에 binding하여 침전되면, 간단한 원심분리를 통해 침전물(EVs)을 회수하는 원리입니다.
구성품
- 2mg Vn96 peptide
- 1ml ME buffer
- Negative control (200ug Vn96 scrambled peptide)
- 50ul purified exosome (positive control)
Plasma 샘플에서의 EV 분리방법
1. Fresh plasma 혹은 냉동 plasma를 실온에서 해동 후 vortexing을 합니다.
2. 1ml plasma를 1ml PBS로 희석하고 잘 혼합합니다.
3. 40ul의 Vn96 peptide stock을 넣고 잘 혼합합니다.
4. 실온에서 1시간 인큐베이션 합니다.
5. 17,000xg에서 15분간 원심분리합니다. EV-Vn96 complex가 튜브 바닥에서 반투명한 pellet으로 나타납니다.
6. 상층액을 조심스럽게 제거한 후, pellet을 2ml PBS에 넣고 잘 혼합합니다.
7. 17,000xg에서 10분간 원심분리하고 상층액을 제거합니다.
8. EV-Vn96 pellet을 PBS로 두번 세척합니다.
9. EV-Vn96 pellet을 바로 사용하거나 -80도에 보관합니다.
10. EV-Vn96 pellet을 western blot, proteomics 분석, RNA/DNA 추출, 구조/기능 연구, 형광 라벨링, cellular transformation assay 등에 사용하실 수 있습니다. (프로토콜 참고)
Urine/Media 샘플에서의 EV 분리방법
1. Urine/Media 샘플을 0.2um 시린지 필터로 필터링하거나 17,000xg에서 15분간 spin하여 상층액을 모읍니다.
2. 20ul의 Vn96 peptide stock을 넣고 잘 혼합합니다.
3. 실온에서 15분-1시간 인큐베이션 합니다.
4. 15,000xg에서 10분간 원심분리합니다. EV-Vn96 complex가 튜브 바닥에서 반투명한 pellet으로 나타납니다.
5. 상층액을 조심스럽게 제거한 후, pellet을 PBS에 넣고 잘 혼합합니다.
6. 15,000xg에서 10분간 원심분리하고 상층액을 제거합니다.
7. EV-Vn96 pellet을 PBS로 두번 세척합니다.
8. EV-Vn96 pellet을 바로 사용하거나 -80도에 보관합니다.
9. EV-Vn96 pellet을 western blot, proteomics 분석, RNA/DNA 추출, 구조/기능 연구, 형광 라벨링, cellular transformation assay 등에 사용하실 수 있습니다. (프로토콜 참고)